| 細(xì)胞培養(yǎng)操作 | ||||
| 收貨方式 | T25瓶 | 凍存管 | ||
| 初步平衡 | 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，放37度培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4h，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài) | 無(wú)須平衡，直接放入-80冰箱（不超過(guò)一周）或者液氮罐保存，建議盡早復(fù)蘇 | ||
| 傳代密度 | 細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng) | 第二天換液并檢查細(xì)胞密度 | ||
| 傳代比例 | 傳代建議1：2傳代，1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿 | 一管細(xì)胞建議接種到10cm培養(yǎng)皿或者T25瓶 | ||
| 傳代方法 | a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 min（視細(xì)胞情況而定），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml*培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。 c、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 | 將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。 | ||
| 注意事項(xiàng) | 1.運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。 2.因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。 | 1.收貨時(shí)若發(fā)現(xiàn)干冰化完，檢查凍存管是否融化，若已融化需直接離心細(xì)胞接種觀察，若未融化可以將細(xì)胞按正常步驟保存； 2.為保證細(xì)胞的高存活率，收到產(chǎn)品后，請(qǐng)立即解凍復(fù)蘇細(xì)胞。 | ||
| 到貨須知 | 1.收到細(xì)胞后，首先觀察并拍照記錄細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，干冰運(yùn)輸?shù)募?xì)胞檢查干冰是否*揮發(fā)，細(xì)胞是否解凍，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。 2.靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照（當(dāng)天以及第 2,3 天請(qǐng)拍照），記錄細(xì)胞狀態(tài) (所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù))；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。 3.由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。 4.仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。 | |||
| 備注：客戶在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，有任何技術(shù)問(wèn)題我們隨時(shí)給予解答。 | ||||
| 三、細(xì)胞凍存操作 | ||||
| 凍存液配方 | 無(wú)血清凍存液，液氮儲(chǔ)存 | |||
| 細(xì)胞密度 | 待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例 | |||
| 凍存方法 | a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，加 1 mL血清重懸細(xì)胞，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。 b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5x106~1x107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。 c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 | |||
| 注意事項(xiàng) | 凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時(shí)復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性，若有異常，及時(shí)調(diào)整實(shí)驗(yàn)方案 | |||
廈門(mén)逸漠生物科技有限公司(Xiamen Immocell Biotechnology Co.,Ltd.)坐落于廈門(mén)國(guó)家留學(xué)創(chuàng)業(yè)園(翔安)產(chǎn)業(yè)園，是一家專注于細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域新產(chǎn)品、新技術(shù)開(kāi)發(fā)。公司產(chǎn)品涵蓋：細(xì)胞系、原代細(xì)胞、標(biāo)記細(xì)胞、耐藥細(xì)胞、免疫細(xì)胞及胎牛血清、培養(yǎng)基、雙抗、無(wú)血清冷凍液、支原體/黑膠蟲(chóng)清除劑、細(xì)胞因子等產(chǎn)品，提供細(xì)胞形態(tài)和免疫相關(guān)檢測(cè)、流式細(xì)胞檢測(cè) 、細(xì)胞學(xué)服務(wù)、分子生物學(xué)檢測(cè)等多種技術(shù)服務(wù)。
逸漠生物(IMMOCELL)擁有一支具有深厚造詣和豐富經(jīng)驗(yàn)的技術(shù)人才，建設(shè)了高規(guī)格的研發(fā)實(shí)驗(yàn)室與生產(chǎn)車(chē)間，建立了規(guī)范的研發(fā)、生產(chǎn)、銷(xiāo)售、客服管理體系。公司與國(guó)內(nèi)外多家醫(yī)院、高等院校、科研院所、生物醫(yī)藥公司建立了良好的合作關(guān)系，贏得了良好的市場(chǎng)聲譽(yù)和廣泛的客戶認(rèn)可，努力成為生命科學(xué)界可靠的合作伙伴和堅(jiān)強(qiáng)的技術(shù)后盾。
細(xì)胞系，原代細(xì)胞，標(biāo)記細(xì)胞，耐藥細(xì)胞，免疫細(xì)胞及胎牛血清，培養(yǎng)基，雙抗，無(wú)血清冷凍液，支原體/黑膠蟲(chóng)清除劑，細(xì)胞因子等
| 形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣，貼壁生長(zhǎng) | 規(guī)格：1×106cells/T25或1mL凍存管 |
|---|
細(xì)胞全稱L929小鼠成纖維細(xì)胞
細(xì)胞別稱NCTC 929; NCTC-929; L cell; L cells; L-cell; L-cells; L cell line; L; 種屬ain L-929; L-929; L 929; L929; L929(NCTC); Clone 929; Earles's cells; Earle's L cells
種屬來(lái)源小鼠
性別雄；
L929小鼠成纖維細(xì)胞 產(chǎn)品信息
